Täname, et külastasite Nature.com. Teie kasutatava brauseri versiooniga on piiratud CSS -tugi. Parimate tulemuste saamiseks soovitame kasutada uuemat brauserit (või keelata ühilduvusrežiim Internet Exploreris). Vahepeal kuvame jätkuva toe tagamiseks saiti ilma stiilide ja JavaScriptita.
MC -i õppimiseks on oluline alus MC õppimiseks. Viiskümmend neli Uus-Meremaa valget küülikut jagati pettusrühma, lihaste implantatsioonigrupi (ME rühm) ja tuuma pulposuse implanteerimisrühma (NPE rühm). NPE rühmas paljastati lülisamba ketas anterolateraalse nimmekirurgilise lähenemisviisiga ja L5 selgroolüli kere punktuaalseks punktsioonile otsaplaadi lähedal kasutati nõela. NP ekstraheeriti L1/2 -st lähikondade ketast süstla abil ja süstiti sinna. Puurige augu subkondraalses luus. Lihaste implanteerimisrühmas ja peksude operatsioonirühma kirurgilised protseduurid ja puurimismeetodid olid samad kui NP implantatsioonirühmas. ME rühmas pandi auku tükk lihaseid, samal ajal kui peksude operatsioonirühmas ei pandud auku midagi. Pärast operatsiooni viidi läbi MRI skaneerimine ja molekulaarne bioloogiline test. NPE-rühmas sisalduv signaal muutus, kuid võlts-operatsioonirühmas ja ME rühmas ei ilmnenud signaali muutust. Histoloogiline vaatlus näitas, et implanteerimiskohas täheldati ebanormaalset kudede proliferatsiooni ning NPE rühmas suurenes IL-4, IL-17 ja IFN-y ekspressioon. NP implanteerimine subkondraalsesse luu võib moodustada MC loommudeli.
Mogesid muutused (MC) on selgroolüli lõppplaatide ja külgneva luuüdi kahjustused, mis on nähtavad magnetresonantstomograafia (MRI) korral. Need on üsna tavalised seotud sümptomitega inimestel1. Paljud uuringud on rõhutanud MC tähtsust seoses alaseljavaluga (LBP) 2,3. De Roos jt.4 ja Modic jt.5 kirjeldasid iseseisvalt esmakordselt kolme erinevat tüüpi subkondraalsignaali kõrvalekaldeid selgroolüli luuüdis. I tüüpi muutused on T1-ga kaalutud (T1W) järjestuste ja hüperintensiivse T2-ga kaalutud (T2W) järjestuste korral hüpointensioon. See kahjustus paljastab lõhede ja külgneva veresoonte granuleerimiskoe luuüdis. Modilised II tüüpi muudatused näitavad suurt signaali nii T1W kui ka T2W järjestustel. Seda tüüpi kahjustuse korral võib leida otsaplaadi hävitamist, samuti külgneva luuüdi histoloogilist rasvade asendamist. Miidukad III tüüpi muudatused näitavad madalat signaali T1W ja T2W järjestustes. Lõppplaatidele vastavaid sklerootilisi kahjustusi on täheldatud6. MC -d peetakse selgroo patoloogiliseks haiguseks ja see on tihedalt seotud selgroo paljude degeneratiivsete haigustega 7,8,9.
Arvestades olemasolevaid andmeid, on mitmed uuringud andnud üksikasjaliku ülevaate MC etioloogiast ja patoloogilistest mehhanismidest. Albert jt. soovitas, et MC võib põhjustada ketta herniatsioon8. HU et al. omistatud MC tõsisele ketta degeneratsioonile10. KROC pakkus välja kontseptsiooni „sisemine ketas rebend”, mis väidab, et korduv kettatrauma võib põhjustada mikrotereid lõppplaadil. Pärast lõhe moodustumist võib tuuma pulposus (NP) lõppplaadi hävitamine käivitada autoimmuunse vastuse, mis viib veelgi MC11 arenguni. MA et al. Jagas sarnast seisukohta ja teatas, et NP-indutseeritud autoimmuunsus mängib võtmerolli MC12 patogeneesis.
Immuunsussüsteemi rakud, eriti CD4+ T abilise lümfotsüüdid, mängivad kriitilist rolli autoimmuunsuse patogeneesis13. Hiljuti avastatud Th17 alamhulk toodab põletikulist tsütokiini IL-17, soodustab kemokiini ekspressiooni ja stimuleerib T-rakke kahjustatud elundites IFN-y14 toomiseks. Th2 rakud mängivad ainulaadset rolli ka immuunvastuse patogeneesis. IL-4 ekspressioon tüüpilise Th2 rakuna võib põhjustada tõsiseid immunopatoloogilisi tagajärgi15.
Ehkki MC16,17,18,19,20,21,22,22,23,24 kohta on tehtud palju kliinilisi uuringuid, puuduvad siiski sobivad loomsed eksperimentaalmudelid, mis võivad jäljendada MC -protsessi, mis sageli esineb inimestel ja võib olla ka inimestel. kasutatakse etioloogia või uute ravimeetodite, näiteks suunatud ravi uurimiseks. Praeguseks on teatatud, et aluseks olevaid patoloogilisi mehhanisme uurivad vaid vähesed MC mudelid.
Albert ja MA välja pakutud autoimmuuniteooria põhjal loodi see uuring lihtsa ja reprodutseeritava küüliku MC mudeli autotransplantaadi NP abil puuritud selgroolüli otsaplaadi lähedal. Muud eesmärgid on jälgida loommudelite histoloogilisi omadusi ja hinnata NP konkreetseid mehhanisme MC arengus. Sel eesmärgil kasutame MC progresseerumise uurimiseks selliseid tehnikaid nagu molekulaarbioloogia, MRI ja histoloogilised uuringud.
Kaks küülikut suri operatsiooni ajal verejooksu ja MRT ajal anesteesia ajal hukkus neli küülikut. Ülejäänud 48 küülikut jäid ellu ja pärast operatsiooni ei ilmnenud käitumis- ega neuroloogilisi tunnuseid.
MRI näitab, et manustatud koe signaali intensiivsus erinevates aukudes on erinev. NPE rühmas L5 selgroolüli signaali intensiivsus muutus järk -järgult 12, 16 ja 20 nädala jooksul pärast sisestamist (T1W järjestus näitas madalat signaali ja T2W järjestus näitas segasignaali ja madalat signaali) (joonis 1C), samas Kahest manustatud osade rühmast püsis samal perioodil suhteliselt stabiilne (joonis 1A, B).
(A) Küüliku nimmepiirkonna representatiivsed MRI -d 3 ajahetkel. Häisoperatsioonigrupi piltidelt ei leitud signaali kõrvalekaldeid. (B) Lülisamba keha signaaliomadused ME rühmas on sarnased peksude operatsioonirühmas ja manustamiskohas aja jooksul olulist signaali muutmist ei täheldata. (C) NPE rühmas on madal signaal T1W järjestuses selgelt nähtav ning segatud signaal ja madal signaal on T2W järjestuses selgelt nähtavad. Alates 12-nädalasest perioodist kuni 20-nädalase perioodini vähenevad t2W järjestuse madalad signaalid ümbritsevad sporaadilised kõrged signaalid.
Ilmset luude hüperplaasiat võib näha NPE rühmas selgroolüli implantatsioonipaigas ja luude hüperplaasia esineb kiiremini 12 kuni 20 nädalat (joonis 2C) võrreldes NPE -rühmaga, modelleeritud selgroolülides olulist muutust ei täheldata kehad; Sham Group ja ME rühm (joonis 2C) 2A, B).
A) Selgroose keha pind implanteeritud osas on väga sile, auk paraneb hästi ja selgroolüli kehas pole hüperplaasiat. (B) Implanteeritud saidi kuju ME rühmas sarnaneb operatsioonirühma omaga ja implanteeritud saidi ilmumisel aja jooksul ei ole ilmselget muutust. C) luude hüperplaasia esines NPE rühmas implanteeritud kohas. Luu hüperplaasia suurenes kiiresti ja ulatus isegi interalateraalse selgroolüli orgu kaudu lülisamba ketta kaudu.
Histoloogiline analüüs pakub üksikasjalikumat teavet luude moodustumise kohta. Joonisel 3 on näidatud postoperatiivsete lõikude fotod, mis on värvitud H&E -ga. Võrguoperatsiooni rühmas olid kondrotsüüdid hästi paigutatud ja rakkude proliferatsiooni ei tuvastatud (joonis 3A). ME rühma olukord sarnanes võlts-operatsiooni rühmas (joonis 3B). Kuid NPE rühmas täheldati implantatsioonikohas suurt hulka kondrotsüüte ja NP-sarnaste rakkude vohamist (joonis 3C);
(A) Trabeculae võib näha otsaplaadi lähedal, kondrotsüüdid on korralikult paigutatud ühtlase raku suuruse ja kujuga ning ilma vohamiseta (40 korda). (B) ME rühma implantatsioonipaiga seisund on sarnane Sham -rühma omaga. Trabeculae ja kondrotsüüte võib näha, kuid implanteerimiskohas (40 korda) pole ilmset vohamist. (B) On näha, et kondrotsüüdid ja NP-sarnased rakud vohavad märkimisväärselt ning kondrotsüütide kuju ja suurus on ebaühtlane (40 korda).
Nii NPE kui ka ME rühmas täheldati interleukiin 4 (IL-4) mRNA, interleukiin 17 (IL-17) mRNA ja interferooni γ (IFN-y) mRNA ekspressiooni. Kui võrreldi sihtgeenide ekspressioonitasemeid, suurenesid NPE rühmas IL-4, IL-17 ja IFN-y geeniekspressioonid võrreldes ME rühma ja SHAM-i operatsioonirühma omadega (joonis 4) (P <0,05). Võrreldes SHAM-i operatsioonirühmaga, suurenes IL-4, IL-17 ja IFN-y ekspressioonitasemed ME rühmas vaid pisut ega saavutanud statistilisi muutusi (p> 0,05).
IL-4, IL-17 ja IFN-y mRNA ekspressioon NPE rühmas näitas oluliselt kõrgemat suundumust kui operatsioonirühmas ja ME rühmas (P <0,05).
Seevastu ME -rühma ekspressioonitasemed ei näidanud olulist erinevust (p> 0,05).
Western blot analüüs viidi läbi, kasutades kaubandusega saadavaid antikehi IL-4 ja IL-17 suhtes, et kinnitada muudetud mRNA ekspressioonimustrit. Nagu on näidatud joonistel 5A, B, võrreldes ME rühma ja operatsioonirühmaga, suurenes NPE rühmas IL-4 ja IL-17 valgu tase märkimisväärselt (p <0,05). Võrreldes SHAM-i operatsioonirühmaga ei suutnud IL-4 ja IL-17 valkude tase ME rühmas ka statistiliselt olulisi muutusi (p> 0,05).
(A) IL-4 ja IL-17 valgu tase NPE rühmas oli oluliselt kõrgem kui ME rühmas ja platseeborühmas (P <0,05). (B) Western blot histogramm.
Operatsiooni ajal saadud inimese proovide piiratud arvu tõttu on MC patogeneesi selged ja üksikasjalikud uuringud mõnevõrra keerulised. Püüdsime luua MC loommudeli, et uurida selle võimalikke patoloogilisi mehhanisme. Samal ajal kasutati NP autotransplantaadi indutseeritud MC kulgu järgimiseks radioloogilist hindamist, histoloogilist hindamist ja molekulaarset bioloogilist hindamist. Selle tulemusel põhjustas NP implantatsioonimudel signaali intensiivsuse järkjärguline muutus 12-nädalaste kuni 20-nädalaste ajapunktideni (segatud madal signaal T1W järjestustes ja madala signaaliga T2W järjestustes), mis näitab kudede muutusi, ning histoloogilist ja molekulaarset Bioloogilised hinnangud kinnitasid radioloogilise uuringu tulemusi.
Selle katse tulemused näitavad, et visuaalsed ja histoloogilised muutused toimusid NPE rühmas selgroolüli keha rikkumise kohas. Samal ajal täheldati IL-4, IL-17 ja IFN-y geenide ekspressiooni, samuti IL-4, IL-17 ja IFN-y, mis näitab, et autoloogse tuuma pulposuste koe rikkumine selgroos Keha võib põhjustada signaalide ja morfoloogiliste muutuste seeriat. Lihtne on leida, et loomamudeli selgroolülide signaaliomadused (madal signaal T1W järjestuses, segasignaal ja T2W järjestuses madala signaali) on väga sarnased inimese selgroolülirakkude omadustega ning ka MRI omadused Kinnitage histoloogia ja kogu anatoomia tähelepanekuid, st selgroolüli keharakkude muutused on progresseeruvad. Ehkki ägedast traumast põhjustatud põletikuline vastus võib ilmneda varsti pärast punktsiooni, näitasid MRI tulemused, et signaali muutused järk -järgult ilmnes 12 nädalat pärast punktsiooni ja püsisid kuni 20 nädalat ilma MRI muutuste taastumise või ümberpööramise märke. Need tulemused viitavad sellele, et autoloogne selgroolüli NP on usaldusväärne meetod küülikute progresseeruva MV loomiseks.
See punktsioonimudel nõuab piisavat oskust, aega ja kirurgilisi pingutusi. Esialgsetes katsetes võib paravertebraalsete ligamentlike struktuuride dissektsioon või liigne stimuleerimine põhjustada selgroolülide osteofüütide moodustumist. Kõrval olevate ketaste kahjustamise ega ärritamise eest tuleks olla ettevaatlik. Kuna järjepidevate ja reprodutseeritavate tulemuste saamiseks tuleb läbitungimise sügavust kontrollida, valmistasime pistiku käsitsi, katkestades 3 mm pikkuse nõela kesta. Selle pistiku kasutamine tagab selgroolüli keha ühtlase puurimissügavuse. Esialgsetes katsetes leidsid kolme operatsiooniga seotud ortopeedilise kirurgi 16-mõõtmelised nõelad hõlpsamini töötada kui 18-mõõtmeliste nõelte või muude meetoditega. Liigse verejooksu vältimiseks puurimise ajal annab nõela veel mõnda aega hoidmine sobivama sisestusaugu, mis viitab sellele, et sel viisil saab kontrollida teatavat MC -d.
Ehkki paljud uuringud on suunatud MC -le, on MC25,26,27 etioloogia ja patogeneesi kohta vähe teada. Varasemate uuringute põhjal leidsime, et autoimmuunsus mängib võtmerolli MC12 esinemises ja arengus. Selles uuringus uuriti IL-4, IL-17 ja IFN-y kvantitatiivset ekspressiooni, mis on CD4+ rakkude peamised diferentseerumisrajad pärast antigeeni stimuleerimist. Meie uuringus, võrreldes negatiivse rühmaga, oli NPE-rühmal suurem IL-4, IL-17 ja IFN-y ekspressioon ning IL-4 ja IL-17 valkude tase oli samuti suurem.
Kliiniliselt suureneb IL-17 mRNA ekspressioon ketta herniatsiooniga patsientide NP rakkudes28. Suurenenud IL-4 ja IFN-y ekspressioonitasemed leiti ka ägeda mittekompressiivse ketta herniatsiooni mudelis võrreldes tervislike kontrollidega29. IL-17 mängib võtmerolli põletikus, kudede vigastus autoimmuunhaigustes30 ja suurendab immuunvastust IFN-γ31 suhtes. MRL/LPR hice32 ja autoimmuunsuse vastuvõtvatel hiirtel33 on teatatud tugevdatud IL-17 vahendatud koekahjustusest. IL-4 võib pärssida põletikuliste tsütokiinide (näiteks IL-1β ja TNFa) ja makrofaagide aktiveerimise34 ekspressiooni. Teatati, et IL-4 mRNA ekspressioon oli NPE rühmas erinev, võrreldes IL-17 ja IFN-y-ga samal ajal; IFN-y mRNA ekspressioon NPE rühmas oli oluliselt kõrgem kui teistes rühmades. Seetõttu võib IFN-y tootmine olla NP interkalatsiooni põhjustatud põletikulise vastuse vahendaja. Uuringud on näidanud, et IFN-y toodetakse mitut tüüpi, sealhulgas aktiveeritud 1. tüüpi abistaja T-rakud, looduslikud tapjarakud ja makrofaagid35,36 ning see on peamine põletikuvastane tsütokiin, mis soodustab immuunvastuseid37.
See uuring viitab sellele, et MC esinemise ja arenguga võib olla seotud autoimmuunse reageerimise. Luoma et al. leidis, et MC ja silmapaistva NP signaaliomadused on MRI -ga sarnased ja mõlemal on T2W järjestuses kõrge signaal38. Mõned tsütokiinid on kinnitatud, et need on tihedalt seotud MC esinemisega, näiteks IL-139. MA et al. soovitas, et NP üles- või allapoole väljaulatuvus võib mõjutada MC12 esinemist ja arengut. Bobechko40 ja Herzbein jt.41 teatasid, et NP on immunotolerantne kude, mis ei saa sündimise ajal veresoonte vereringesse siseneda. NP eendid tutvustavad võõrkehasid verevarustusse, vahendades seeläbi kohalikke autoimmuunseid reaktsioone42. Autoimmuunsed reaktsioonid võivad esile kutsuda palju immuunfaktoreid ja kui need tegurid puutuvad kudedega pidevalt kokku, võivad need põhjustada muutusi signaalides43. Selles uuringus on IL-4, IL-17 ja IFN-y üleekspressioon tüüpilised immuunfaktorid, mis tõestavad veelgi NP ja MCS44 tihedat seost. See loommudel jäljendab NP läbimurret ja sisenemist otsaplaadile. See protsess näitas veelgi autoimmuunsuse mõju MC -le.
Nagu arvata võis, pakub see loomamudel meile võimalikku platvormi MC õppimiseks. Sellel mudelil on siiski mõned piirangud: esiteks tuleb loomade vaatlusfaasis histoloogiliste ja molekulaarbioloogia testimiseks eutanistada mõned vaheetapi küülikud, nii et mõned loomad on aja jooksul kasutamisest välja jäänud. Teiseks, kuigi selles uuringus on seatud kolm ajapunkti, modelleerisime kahjuks ainult ühte tüüpi MC -d (Mosic I tüüpi muutused), nii et sellest ei piisa inimese haiguste arendamise protsessi esindamiseks ja tuleb seada rohkem ajapunkte. Parem jälgige kõiki signaali muutusi. Kolmandaks, kudede struktuuri muutusi saab tõepoolest selgelt näidata histoloogilise värvimisega, kuid mõned spetsialiseeritud tehnikad võivad selle mudeli mikrostruktuurilisi muutusi paremini paljastada. Näiteks kasutati polariseeritud valguse mikroskoopiat, et analüüsida fibrokartilaaduri moodustumist küülikutevahelistes ketastes45. NP pikaajaline mõju MC ja lõppplaadile nõuavad täiendavat uurimist.
Viiskümmend neli isast Uus-Meremaa valget küülikut (kaal umbes 2,5–3 kg, vanus 3-3,5 kuud) jagati juhuslikult Sham operatsioonirühma, lihaste implantatsioonirühma (ME rühm) ja närvijuure implantatsioonirühma (NPE rühm). Kõik eksperimentaalsed protseduurid kiitis heaks Tianjini haigla eetikakomitee ja eksperimentaalsed meetodid viidi läbi rangelt vastavalt kinnitatud juhistele.
S. Sobajima 46 kirurgilise tehnikaga on tehtud mõned parandused. Iga küülik pandi külgmisse lamamisseasendisse ja viie järjestikuse nimmevahelise algketta (IVD) eesmine pind paljastati posterolateraalse retroperitoneaalse lähenemisviisi abil. Igale küülikule anti üldne anesteesia (20% uretaan, 5 ml/kg kõrvaveeni kaudu). Naha pikisuunaline sisselõige tehti ribide alumisest servast vaagna ääreni, 2 cm ventraalne kuni paravertebraalsete lihasteni. Parempoolne anterolateraalne selg L1 -st L6 -st paljastati ülekuulva subkutaanse koe, retroperitoneaalse koe ja lihaste terava ja nüri lahkamisega (joonis 6A). Ketta tase määrati vaagna äärega L5-L6 ketta taseme anatoomilise vaatamisväärsusena. L5 selgroolüli otsaplaadi lähedal asuva augu puurimiseks kasutage 16-mõõtmelist punktsiooni nõela 3 mm sügavusele (joonis 6B). Autoloogse tuuma pulpous aspiratsiooniks L1-L2 intervertebraalses ketas (joonis 6C). Eemaldage tuuma pulpous või lihased vastavalt iga rühma nõuetele. Pärast puuri augu süvenemist asetatakse sügavale fastsiale, pealiskaudsele fastsiale ja nahale imavad õmblused, hoolitsedes selle eest, et mitte kahjustada selgroolüli keha periosteaalset koe operatsiooni ajal.
A) L5 - L6 ketas paljastatakse posterolateraalse retroperitoneaalse lähenemisviisi kaudu. (B) L5 lõppplaadi lähedal augu puurimiseks kasutage 16-mõõtmelist nõela. C) Autoloogsed MF -id koristatakse.
Üldnesteesiat manustati 20% uretaaniga (5 ml/kg) manustatud kõrvaveeni kaudu, ja nimmepiirkonna radiograafid korrati pärast operatsiooni 12, 16 ja 20 nädalat.
Küülikud ohverdati ketamiini (25,0 mg/kg) ja intravenoosse naatrium -pentobarbitaali (1,2 g/kg) intramuskulaarse süstimisega 12, 16 ja 20 nädala pärast operatsiooni. Histoloogiliseks analüüsiks eemaldati kogu selgroo ja viidi läbi reaalne analüüs. Immuunfaktorite muutuste tuvastamiseks kasutati kvantitatiivset pöördtranskriptsiooni (RT-qPCR) ja Western blot.
MRI -uuringud viidi läbi küülikutes, kasutades 3,0 -tolline kliiniline magnet (GE Medical Systems, Firenze, SC), mis oli varustatud ortogonaalse jäsememähise vastuvõtjaga. Küülikud tuimastati kõrvaveeni kaudu 20% uretaaniga (5 ml/kg) ja seejärel asetati lamav magnetisse, nimmepiirkonnaga, mille keskpunkt oli 5-tolline läbimõõduga ümmargune pinna mähis (GE Medical Systems). Koronaalsed T2-kaalutud lokaliseerija pildid (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) saadi nimmeketta asukoha määratlemiseks L3-L4-st L5-L6-ni. Sagitaaltasapinnaga T2-kaalutud viilud saadi järgmiste sätetega: kiire spin-kajajärjestus kordumisajaga (TR) 2200 ms ja kajaaeg (TE) 70 ms, maatriks; visuaalne väli 260 ja kaheksa stiimulit; Lõika paksus oli 2 mm, vahe oli 0,2 mm.
Pärast viimase foto tegemist ja viimane küülik tapeti, eemaldati histoloogiliseks uurimiseks petlik, lihaste manustatud ja NP-kettad. Kuded fikseeriti ühe nädala jooksul 10% neutraalses puhverdatud formaliinis, deklareeriti etüleendiamiinetetraadikhappega ja parafiiniga. Koeplokid manustati parafiini ja lõigati mikrotoomi abil sagitaalseks lõikudeks (5 μm paksuseks). Sektsioonid värviti hematoksüliini ja eosiiniga (H&E).
Pärast igas rühmas küülikutest lähtuvate ketaste kogumist ekstraheeriti kogu RNA, kasutades UNIQ-10 veergu (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Hiina) vastavalt tootja juhistele ja IMPOM II pöördtranskriptsioonisüsteemile (Promega Inc. , Madison, WI, USA). Viidi läbi pöördtranskriptsioon.
RT-qPCR viidi läbi Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) ja SYBR Green Jump Start Taq ReadyMixi (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) järgi vastavalt tootja juhistele. PCR reaktsiooni maht oli 20 μL ja sisaldas 1,5 μl lahjendatud cDNA -d ja 0,2 μM iga praimerit. Praimerid kavandasid oligoperfekti kujundaja (Invitrogen, Valencia, CA) ja seda toodeti Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Hiina) (tabel 1). Kasutati järgmisi termilisi tsüklitingimusi: esialgne polümeraasi aktiveerimise samm temperatuuril 94 ° C 2 minutit, seejärel 40 tsüklit 15 sekundit temperatuuril 94 ° C matriitside denatureerimiseks, lõõmutades 1 minutit 60 ° C juures, pikendus ja fluorestsents. Mõõtmised viidi läbi 1 minut temperatuuril 72 ° C. Kõiki proove võimendati kolm korda ja RT-qPCR analüüsiks kasutati keskmist väärtust. Amplifikatsiooniandmeid analüüsiti FlexStation 3 abil (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). IL-4, IL-17 ja IFN-y geeni ekspressioon normaliseeriti endogeense kontrolli jaoks (ACTB). Siht-mRNA suhteline ekspressioonitasemed arvutati 2-ΔΔCT meetodil.
Koguvalk ekstraheeriti kudedest, kasutades kudede homogenisaatori RIPA lüüsipuhvris (mis sisaldas proteaasi ja fosfataasi inhibiitori kokteili) ja tsentrifuugiti seejärel kudede prahi eemaldamiseks 20 minutit temperatuuril 4 ° C 13 000 pööret minutis. Viiskümmend mikrogrammi valgut laaditi sõiduraja kohta, eraldati 10% SDS-PAGE-ga ja kanti seejärel PVDF-membraanile. Blokeerimine viidi läbi 5% rasvavaba kuivpiimas Tris-puhverdatud soolalahuses (TBS), mis sisaldas 0,1% Tween 20 1 tund toatemperatuuril. Membraani inkubeeriti küüliku antiseikusse mekoriinivastase primaarse antikehaga (lahjendatud 1: 200; Boster, Wuhan, Hiina) (lahjendatud 1: 200; Bioss, Peking, Peking, Hiina) üleöö temperatuuril 4 ° C ja reageeris teistel päevadel; Sekundaarse antikehaga (kitsevastane immunoglobuliin G lahjendus 1: 40 000) koos mädarõika peroksüdaasiga (Boster, Wuhan, Hiina) 1 tund toatemperatuuril. Western blot signaalid tuvastati kemoluminestsentsmembraani suurenenud kemoluminestsentsiga pärast röntgenikiirguse kiiritamist. Densitomeetriliseks analüüsiks skaneeriti ja kvantifitseeriti blotid, kasutades tarkvara Bandscan ning tulemused väljendati sihtgeeni immunoreaktiivsuse ja tubuliini immunoreaktiivsuse suhtena.
Statistilised arvutused viidi läbi tarkvara SPSS16.0 abil (SPSS, USA). Uuringu käigus kogutud andmeid väljendati keskmise ± standardhälbena (keskmine ± SD) ja neid analüüsiti ühesuunaliste korduvate dispersioonanalüüsi abil (ANOVA), et teha kindlaks erinevused kahe rühma vahel. P <0,05 peeti statistiliselt oluliseks.
Seega võib MC loommudeli loomine autoloogsete NP -de implanteerides selgroolüli kehasse ja teostades makroanatoomilist vaatlust, MRI analüüsi, histoloogilist hindamist ja molekulaarset bioloogilist analüüsi, mis võib muutuda oluliseks vahendiks inimese MC mehhanismide hindamiseks ja mõistmiseks ning uue terapeutilise väljatöötamiseks sekkumised.
Kuidas seda artiklit tsiteerida: Han, C. jt. Miidukate muutuste loommudel määrati autoloogse tuuma pulposuse implanteerimisega nimmepiirkonna subkondraalsesse luu. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. ja Boos, N. Lülisamba nimmepiirkonna magnetresonantstomograafia: ketta herniatsiooni ja säilitamise levimus, närvide juurte kokkusurumine, lõppplaadi kõrvalekalded ja tahke liigese osteoartriidi aasümptomaatilistes vabatahtlikes vabatahtlikes . määr. Radiology 209, 661–666, doi: 10.1148/radioloogia.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS ja Leboeuf -es, K. Mogesid muutused ja nende seos kliiniliste leidudega. Euroopa lülisamba ajakiri: Euroopa lülisamba seltsi ametlik väljaanne, seljaaju deformatsiooni Euroopa Selts ja Euroopa Emakakaela lülisamba uuringute ühing 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et al. Liidulised muutused nimme selgroolüli lõppplaatides: levimus ja seos alaseljavalu ja ishiacaga keskealiste meessoost töötajatel. Lülisammas 32, 1116–1122, doi: 10.1097/01.br.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. ja Dalinka, M. luuüdi MRI muutub nimmepiirkonna degeneratiivse haiguse lõppplaadi lähedal. Ajr. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/AJR.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ ja Carter, Jr Degeneratiivne ketashaigus: selgroolüli luuüdi muutuste hindamine MRI -ga. Radioloogia 166, 193–199, doi: 10.1148/radioloogia.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS ja Carter, Jr degeneratiivse ketase haiguse pildistamine. Radioloogia 168, 177–186, doi: 10.1148/radioloogia.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS jt. Neovertebraalse lõppplaadi (modiliste) signaali muutuste ennustajad elanikkonnas. Euroopa lülisamba ajakiri: Euroopa lülisamba seltsi ametlik väljaanne, seljaaju deformatsiooni Euroopa Selts ja Euroopa Emakakaela lülisamba uuringute ühing, 19. divisjon, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB ja Mannisch, K. Mogesid muutused pärast nimmeketta herniatsiooni. Euroopa lülisamba ajakiri: Euroopa lülisamba seltsi ametlik väljaanne, seljaaju deformatsiooni Euroopa Selts ja Euroopa Emakakaela lülisamba uuringute selts 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttala, L., Luoma, K. ,wmas, T., Gronblad, M. ja Kaapa, E. Mogesid I tüüpi muutused võivad ennustada kiiresti progresseeruvat deformatsioonilise ketase degeneratsiooni: 1-aastane perspektiivne uuring. Euroopa Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/S00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ ja ventilaator, SW Modic muudatused: võimalikud põhjused ja panus nimmeketta degeneratsiooni. Meditsiinilised hüpoteesid 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV sisemise ketta rebend. Ketta prolapsiprobleemid üle 50 aasta. Lülisammas (Phila PA 1976) 11, 650–653 (1986).
Postiaeg: 13. detsember 20124